KeyTec® TR-FRET GDP loaded KRAS[G12D]/RAF1结合检测试剂盒可用于测定KRAS[G12D](已装载GDP)与RAF1蛋白之间的互作。本试剂盒运用KeyTec® TR-FRET技术,可用于小分子抑制剂、多肽或抗体阻断剂的高通量筛选,具有简单快速、准确性高等特点。
本方法的基本原理如下图所示,Solar Eu偶联的抗标签2(Tag 2)抗体可特异性识别带有Tag 2的RAF1蛋白,LA偶联的抗标签1(Tag 1)抗体可识别带有Tag1的KRAS[G12D]蛋白。当RAF1与KRAS[G12D]结合时,分别偶联了Solar Eu和LA的标签抗体因而相互靠近,在外部光源的激发下,供体与受体之间发生能量共振转移;检测特定波长(665 nm)的信号强度即可测定KRAS[G12D]与RAF1蛋白之间相互作用的程度。因此,阻断KRAS[G12D]与RAF1相互作用的化合物、多肽或抗体会导致TR-FRET信号降低。